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ATCC細胞的分類檢測是怎么完成的?

原載自:www.r4leiq.cn[行情動態]  2021-09-10  瀏覽次數:962

   ATCC細胞說明書有關于細胞復蘇和傳代的詳細步驟,除說明書外,還有另外一份重要文件-COA(Certificate of Analysis)。COA中包含具體批次信息,如每管細胞的數量,建議復蘇使用的培養基用量,已知細胞的傳代代次等重要信息。
  ATCC細胞的分類檢測步驟如下:
  1.樣本儲存
  收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70℃可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。
  2.試劑盒成分
  人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬;植物細胞因子、骨代謝、細胞凋亡、激素內分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。主要用于科研方面,不用于臨床診斷。可以用于檢測各種指標。
  相關操作方法:
  1.取成年新西蘭大白兔,耳緣靜脈注射空氣處死后,取下兔子的雙腿,立即用75%乙醇浸泡。
  2.移入細胞房內,去除雙腿表面的皮毛及肌肉,剪取關節段,移至超菌工作臺內。
  3.PBS洗滌數次,用手術刀或彎剪將關節表面的軟骨組織取下。
  4.軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min。
  5.4℃靜置5min;棄上清,PBS洗滌,去上清。加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化2H。
  6.加入生長培養基終止消化,反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM*培養基重新懸浮細胞,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
  7.細胞傳代后放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。細胞*展開后即可固定做原代鑒定。

 

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